Meis1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401481-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Meis1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Meis1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Meis1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MEIS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Meis1/2/3: sc-101850
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Meis1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Meis1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MEIS1 kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor der TALE-Klasse, der mit PBX- und HOX-Proteinen zusammenwirkt, um während der Entwicklung und der Homöostase erwachsener Gewebe linienspezifische Programme der Genexpression zu steuern. In hämatopoetischen Zellen trägt MEIS1 zu transkriptionellen Netzwerken bei, die die Erhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen, die Zellzykluskontrolle und die Differenzierung regulieren, und es ist mit Signalwegen verknüpft, die den Chromatinzustand und die Enhancer-Aktivität bestimmen. Eine fehlregulierte MEIS1-Expression oder Störungen von Enhancern wurden mit Leukämogenese in Verbindung gebracht, darunter MLL-rearrangierte akute Leukämien, bei denen MEIS1 mit Programmen des HOXA-Clusters kooperieren kann. MEIS1 ist außerdem an kardiovaskulären und neuroentwicklungsbezogenen Prozessen beteiligt und stellt damit einen nützlichen Knotenpunkt dar, um die Transkriptionsregulation über mehrere Organsysteme hinweg zu untersuchen.
Meis1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MEIS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MEIS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MEIS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MEIS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.