Plasmide CRISPR d'Activation (h) Meis1: sc-401481-ACT

MEIS1 code un facteur de transcription homeobox de type TALE qui forme des complexes coopératifs avec les protéines HOX et PBX afin de contrôler la spécification des lignages, le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, ainsi que l’organisation du développement. Meis1 module des programmes transcriptionnels liés au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et à la régulation de la chromatine, notamment des voies coordonnant l’auto-renouvellement et la maturation dans les lignages sanguins et neuronaux. Une expression dérégulée de MEIS1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la leucémogenèse et d’états progéniteurs aberrants, et des études d’association génétique impliquent des réseaux régulés par MEIS1 en neurobiologie et dans des traits liés au sommeil. Ces caractéristiques font de MEIS1 un nœud pertinent pour étudier les circuits transcriptionnels, la logique des enhancers et les décisions de destinée cellulaire dans des modèles cellulaires humains.

Meis1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MEIS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Meis1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MEIS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MEIS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Meis1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MEIS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Meis1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Meis1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MEIS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.