megalin/LRP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420631-ACT

O gene Lrp2 de camundongo codifica a megalina/LRP2, um grande receptor endocítico da família dos receptores de LDL que medeia a captação dependente de clatrina de diversos ligantes, incluindo transportadores de vitaminas, lipoproteínas e morfógenos. É altamente expresso em epitélios absortivos, como os túbulos proximais renais, e contribui para a reabsorção mediada por receptor, a homeostase de nutrientes e a regulação da disponibilidade extracelular de ligantes. A megalina/LRP2 interage com redes de sinalização e tráfego envolvidas no desenvolvimento, incluindo as vias relacionadas a Sonic hedgehog e a retinoides, ao controlar a internalização de ligantes e a competência de sinalização a jusante. A desregulação da atividade de Lrp2 tem sido associada a defeitos no transporte epitelial e no padrão de desenvolvimento, reforçando sua relevância em modelos de disfunção renal e do neurodesenvolvimento.

megalin/LRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lrp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

megalin/LRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lrp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lrp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de megalin/LRP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lrp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de megalin/LRP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via megalin/LRP2 em células tumorais com expressão de Lrp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.