Plasmide Double Nickase (h) MEF-2D: sc-403475-NIC

MEF2D code pour le facteur de transcription humain MEF-2D, une protéine de liaison à l’ADN de la famille MADS-box/MEF2 qui intègre la signalisation dépendante du calcium à des programmes d’expression génique spécifiques du contexte. MEF-2D régule la différenciation et la transcription adaptative dans de multiples lignées, notamment les états myogéniques et neuronaux, en coopérant avec des cofacteurs tels que les HDAC de classe IIa et en répondant aux voies MAPK et calcineurine. Grâce à ces interactions sensibles aux signaux, MEF-2D contribue à coordonner l’état de la chromatine et les sorties transcriptionnelles qui façonnent le contrôle du cycle cellulaire, la survie et l’identité de lignée. Une activité MEF2D dérégulée et des réseaux transcriptionnels pilotés par MEF2D altérés ont été impliqués dans la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer et dans la génétique des hémopathies malignes, ce qui étaye son utilisation comme nœud fonctionnel dans les études de voies de signalisation et de mécanismes pathogéniques.

MEF-2D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MEF2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MEF2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MEF2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MEF2D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.