Plasmide CRISPR/Cas9 KO Med6 (h): sc-403204

Présentation

MED6 code Med6, une sous-unité essentielle du complexe Mediator, qui fait le lien entre des facteurs de transcription spécifiques de séquence et l’ARN polymérase II afin de coordonner l’initiation de la transcription et la réactivité des promoteurs. En favorisant l’assemblage et la stabilité de la machinerie de pré-initiation, Med6 contribue à la régulation de programmes d’expression génique propres à l’état cellulaire, notamment des voies contrôlant la prolifération, la différenciation et la transcription adaptative au stress. Une altération de la fonction de Mediator peut remodeler les sorties transcriptionnelles globales et est fréquemment étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique, de dérégulations du développement et de l’instabilité du génome liée à la transcription. La perturbation de MED6 constitue donc un point d’entrée exploitable pour disséquer la manière dont la transcription dépendante de Mediator intègre les signaux dans la chromatine et l’activité de l’ARN polymérase II dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Med6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MED6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MED6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MED6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Med6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MED6 pour l'étude de la signalisation de Med6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MED6 essentiels à la fonction de Med6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MED6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Med6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Med6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MED6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Med6 plasmide HDR (h) et le Med6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MED6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MED6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.