Med22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423222

Übersicht

Med22 kodiert eine zentrale Untereinheit des Mediator-Komplexes, eines konservierten transkriptionellen Koregulators, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II verbindet. In Mauszellen unterstützt MED22 den Zusammenbau und die Funktion des Kopfmoduls des Mediators und beeinflusst dadurch promotorabhängige Transkription, Initiationsdynamiken sowie umfassendere Genexpressionsprogramme, die mit Entwicklung und Differenzierung verknüpft sind. Durch die Koordination signalabhängiger transkriptioneller Antworten trägt MED22 zu Signalwegen bei, die Zellzykluskontrolle, Stressantworten und Zelllinienspezifizierung steuern. Eine Fehlregulation von Mediator-Komponenten wurde mit einer gestörten transkriptionellen Homöostase und krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Med22 ein nützlicher Knotenpunkt ist, um die Verwundbarkeit transkriptioneller Netzwerke zu untersuchen.

Das Med22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Med22-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Med22-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Med22 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Med22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Med22-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Med22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Med22-Exone abzielen, die für die Med22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Med22-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Med22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Med22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Med22-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Med22 HDR-Plasmid (m) und Med22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Med22-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Med22-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.