Plasmide CRISPR d'Activation (h) MeCP2: sc-401228-ACT

MECP2 code la protéine 2 de liaison au méthyl-CpG (MeCP2), un régulateur associé à la chromatine qui se fixe à l’ADN méthylé et façonne les programmes transcriptionnels en coordonnant la répression et l’activation épigénétiques. MeCP2 influence la maturation neuronale, la plasticité synaptique et l’expression génique dépendante de l’activité via des interactions avec des corépresseurs et des complexes de remodelage de la chromatine, reliant la dynamique de la méthylation de l’ADN au traitement de l’ARN et à la stabilité du génome. Une dérégulation du dosage de MECP2 perturbe les voies neurodéveloppementales et modifie l’équilibre excitation–inhibition, ce qui en fait une cible particulièrement pertinente pour l’étude du contrôle transcriptionnel dans les neurones et les cellules gliales différenciés. Parce que MeCP2 intègre les signaux épigénétiques à l’architecture de la chromatine à longue portée, elle est largement utilisée comme modèle pour explorer les réseaux de régulation génique dans le système nerveux humain.

MeCP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MECP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MeCP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MECP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MECP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MeCP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MECP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MeCP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MeCP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MECP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.