MDR3/ABCB4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404167-ACT

ABCB4（MDR3）は、肝細胞の胆管側（カナリキュラー）膜に局在するATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードしており、ATP依存的にホスファチジルコリンを胆汁中へ移送します。この脂質輸送は胆汁形成を支えるとともに、胆汁組成を調整することで胆道膜の完全性維持に寄与し、肝臓における脂質恒常性や膜輸送（トラフィッキング）経路とも関わります。MDR3/ABCB4活性が破綻すると胆汁中リン脂質のバランスが変化し、胆汁うっ滞性の肝表現型や肝胆道系障害と関連します。そのためABCB4は、胆汁酸‐リン脂質カップリング、肝細胞極性、ならびに肝生理におけるトランスポーター制御のモデルで広く研究されています。

MDR3/ABCB4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCB4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MDR3/ABCB4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCB4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCB4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MDR3/ABCB4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCB4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMDR3/ABCB4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCB4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMDR3/ABCB4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。