MDR1/ABCB1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400178-LAC

O ABCB1 codifica a MDR1/glicoproteína P (ABCB1), um transportador de efluxo da família ABC (ATP-binding cassette) que exporta uma ampla gama de xenobióticos e metabólitos endógenos através da membrana plasmática. Ao regular o acúmulo intracelular de fármacos e a desintoxicação celular, a MDR1 influencia a farmacocinética e as funções de barreira em tecidos como intestino, fígado, rim e a barreira hematoencefálica. A atividade do ABCB1 interage com redes de resposta ao estresse celular e de transporte de membrana, moldando a exposição a compostos citotóxicos e contribuindo para fenótipos de resistência a múltiplos fármacos. A expressão desregulada de ABCB1 tem sido associada a alterações na distribuição de fármacos e à quimiorresistência em diversos modelos tumorais, tornando-o um alvo fundamental para estudos de biologia de transportadores e mecanismos de resistência.

As Partículas de Ativação Lentivirais MDR1/ABCB1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ABCB1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MDR1/ABCB1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ABCB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MDR1/ABCB1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ABCB1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.