MDA5 Lentiviral Activation Particles (m): sc-427977-LAC

Das Mausgen *Ifih1* kodiert das Melanoma Differentiation–Associated Protein 5 (MDA5), eine zytosolische DExD/H-Box-RNA-Helikase, die lange doppelsträngige RNA erkennt, die während der Virusreplikation entsteht. Nach der RNA-Bindung signalisiert MDA5 über MAVS und aktiviert TBK1/IKKε sowie nachgeschaltete IRF3/IRF7- und NF-κB-Programme, wodurch Typ-I-Interferone und interferonstimulierte Gene induziert werden. Dieser Signalweg prägt die angeborene antivirale Immunität, steht in Wechselwirkung mit Autophagie- und Inflammasom-assoziierten Antworten und beeinflusst die Antigenpräsentation sowie den Entzündungstonus. Eine fehlregulierte MDA5-Signalgebung wurde mit aberranten Interferon-Signaturen und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, wodurch *Ifih1* ein nützlicher Knotenpunkt ist, um Aktivierung der angeborenen Immunität und entzündungsrelevante Phänotypen in Mausmodellen zu untersuchen.

MDA5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ifih1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MDA5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ifih1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MDA5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ifih1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.