MCR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400672-NIC

NR3C2 codifica o receptor de mineralocorticoides (MCR), um receptor nuclear ativado por ligante que se liga a mineralocorticoides e glicocorticoides para regular programas transcricionais que controlam o transporte epitelial de sódio, a homeostase do potássio, o volume de líquido extracelular e a regulação da pressão arterial. Após a ligação do hormônio, o MCR transloca-se para o núcleo e modula a expressão gênica por meio de elementos de resposta hormonal e de interações com correaguladores, cruzando-se com a sinalização MAPK e com redes transcricionais inflamatórias. No rim, no cólon e em tecidos cardiovasculares, o NR3C2 influencia o transporte iônico mediado por ENaC/SGK1 e as respostas celulares ao estresse, vinculando a atividade do receptor ao equilíbrio eletrolítico e ao remodelamento tecidual. A desregulação ou mutação de NR3C2 está associada a distúrbios da sinalização mineralocorticoide, incluindo fenótipos de perda de sal e alterações da fisiologia cardiovascular e renal, sustentando sua relevância em estudos mecanísticos de vias endócrinas e cardiorrenais.

MCR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NR3C2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NR3C2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NR3C2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NR3C2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.