Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCP-2 (m): sc-422848

Présentation

Le gène murin **Ccl8** code la protéine chimioattractante des monocytes-2 (**MCP-2**), une chimiokine de type CC qui coordonne le trafic des leucocytes en signalant via des récepteurs de chimiokines tels que **CCR1**, **CCR2** et **CCR5**. MCP-2 module la chimiotaxie inflammatoire, régule le recrutement des cellules myéloïdes et contribue au dialogue entre les compartiments immunitaires inné et adaptatif au sein des tissus lésés ou infectés. L’expression de **Ccl8** est fréquemment induite en aval de **NF-κB** et de programmes dépendants des cytokines, reliant ainsi la reconnaissance des motifs et la signalisation inflammatoire à la migration cellulaire. Une activité de MCP-2 dérégulée a été impliquée dans des états inflammatoires chroniques, des phénotypes auto-immuns et l’infiltration immunitaire associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des microenvironnements immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCP-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCP-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl8 pour l'étude de la signalisation de MCP-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl8 essentiels à la fonction de MCP-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MCP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCP-2 plasmide HDR (m) et le MCP-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.