Plásmido Doble Nickase (h) MCM5: sc-401980-NIC

MCM5 codifica una subunidad esencial del complejo helicasa de mantenimiento de minicromosomas (MCM2–7), que licencia los orígenes de replicación e impulsa el desenrollamiento del ADN durante la fase S. Al coordinar el inicio de la replicación, la progresión de la horquilla y la estabilidad del replisoma, MCM5 contribuye a la integridad del genoma y a transiciones ordenadas del ciclo celular a través de los puntos de control de la fase S y de G2/M. La expresión desregulada de MCM5 o una alteración en el licenciamiento de la replicación se asocia con estrés replicativo, inestabilidad cromosómica y fenotipos proliferativos observados en múltiples contextos de cáncer. Como factor de replicación, MCM5 se utiliza con frecuencia para estudiar el momento (timing) de la replicación del ADN, la señalización de los puntos de control y los mecanismos que acoplan la replicación con las respuestas al daño del ADN.

MCM5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCM5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCM5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCM5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCM5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.