Mcl-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400079-LAC

MCL1 codiert für Mcl-1, ein antiapoptotisches Protein der BCL-2-Familie, das vorwiegend an der äußeren Mitochondrienmembran lokalisiert ist und die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran hemmt, indem es proapoptotische BH3-only-Faktoren sequestriert und die Aktivierung von BAX/BAK inhibiert. Seine Menge wird durch Wachstumsfaktorsignale und zellulären Stress über transkriptionelle Programme und einen schnellen proteasomalen Abbau streng reguliert, wodurch Mcl-1 zu einem zentralen Knotenpunkt wird, der Überlebenssignale mit der intrinsischen Apoptose verknüpft. MCL1 ist in Signalwegen wie PI3K/AKT, MAPK/ERK und integrierten Stressantworten eingebunden, die Zellschicksalsentscheidungen unter metabolischem, genotoxischem oder ER-Stress feinabstimmen. Eine dysregulierte MCL1-Expression und -Abhängigkeit wird häufig in Krebs- und hämatologischen Malignitätsmodellen untersucht; eine veränderte apoptotische „Priming“-Situation unter Beteiligung von Mcl-1 ist zudem relevant für Studien zur Immunhomöostase und zur Biologie von Gewebeschädigungen.

Mcl-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MCL1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Mcl-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MCL1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Mcl-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MCL1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.