Mcl-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400079-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mcl-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mcl-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Mcl-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MCL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mcl-1: sc-12756
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mcl-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400079-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mcl-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400079-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCL1 kodiert das antiapoptotische BCL-2-Familienprotein Mcl-1, einen zentralen Regulator der Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran, der die BAX/BAK-abhängige Apoptose hemmt und das Zellüberleben unterstützt. Mcl-1 integriert Signale aus Stress- und Wachstumswegen, darunter PI3K–AKT, MAPK/ERK und integrierte Stressantworten, und wird dynamisch durch Transkription, schnellen proteasomalen Abbau und Phosphorylierung reguliert. Durch die Festlegung der Apoptoseschwelle und die Aufrechterhaltung der mitochondrialen Homöostase beeinflusst MCL1 die Erhaltung hämatopoetischer Zellen, die Aktivierung von Immunzellen sowie die Reaktionen auf metabolischen und genotoxischen Stress. Eine dysregulierte MCL1-Expression oder -Stabilität ist häufig mit veränderter Apoptose in der Krebsbiologie sowie mit Zellüberlebensphänotypen verbunden, die für Neurodegeneration und entzündliche Kontexte relevant sind.
Mcl-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MCL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MCL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MCL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MCL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.