Plasmide Double Nickase (m) MCH-1R: sc-431527-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MCH-1R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MCH-1R Double Nickase (m) et le plasmide MCH-1R Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mchr1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MCH-1R | sc-431527-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) MCH-1R | sc-431527-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mchr1 code le récepteur 1 de l’hormone de concentration de la mélanine (MCH-1R), un GPCR de classe A qui se couple principalement à Gi/o afin de moduler la signalisation de l’AMPc, la mobilisation du calcium et des voies kinasiques en aval telles que MAPK/ERK dans les neurones. Chez la souris, MCH-1R est enrichi dans des circuits du SNC qui intègrent l’équilibre énergétique, le comportement alimentaire, l’éveil et le traitement de la récompense, reliant l’activité du récepteur à la régulation neuroendocrinienne. Une altération de la signalisation de Mchr1 a été étudiée dans des modèles pertinents pour l’obésité, la dysrégulation métabolique et des phénotypes neuropsychiatriques, où des changements de l’excitabilité synaptique et du tonus neuromodulateur contribuent à des effets à l’échelle des systèmes. En tant que nœud GPCR, MCH-1R constitue aussi un point d’entrée exploitable pour disséquer le trafic du récepteur, la désensibilisation et la signalisation biaisée selon les voies dans des contextes cellulaires natifs.
MCH-1R Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mchr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mchr1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mchr1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mchr1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.