Plásmido CRISPR de Activación (h) MC5-R: sc-403844-ACT

El MC5R humano codifica el receptor de melanocortina 5 (MC5-R), un receptor acoplado a proteína G activado por péptidos melanocortínicos derivados del procesamiento de POMC. MC5-R se acopla principalmente a Gs para estimular la adenilato ciclasa, elevar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB, con efectos aguas abajo que pueden converger con la señalización MAPK y redes más amplias de regulación de GPCR. En contextos inmunitarios y epiteliales, la señalización de MC5-R se ha vinculado con la modulación del tono inflamatorio, la actividad secretora y la homeostasis celular. La alteración de la actividad de la vía de las melanocortinas se ha investigado en relación con la biología cutánea, la regulación metabólica y fenotipos inflamatorios, lo que respalda el uso de MC5R como un nodo mecanístico en estudios de mapeo de vías.

MC5-R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MC5R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MC5-R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MC5R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MC5R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MC5-R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MC5R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MC5-R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MC5-R en células tumorales con expresión de MC5R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.