MC2-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402854-ACT

MC2R kodiert den Melanocortin-2-Rezeptor (MC2-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der in der Nebennierenrinde als primärer Rezeptor für das adrenokortikotrope Hormon (ACTH) fungiert. Nach Ligandenbindung koppelt MC2‑R an Gs, stimuliert die Adenylatcyclase, erhöht den cAMP-Spiegel und aktiviert PKA-abhängige Transkriptionsprogramme, die steroidogene Enzyme und die Physiologie der Nebenniere regulieren. Die MC2R-Aktivität ist in die Melanocortin-Signalgebung sowie in Signalwege der Steroidhormonsynthese der Nebenniere eingebunden, die die Glukokortikoidproduktion und Stressantworten steuern. Eine Fehlregulation oder ein Funktionsverlust von MC2R ist mit einer verminderten ACTH-Antwort und Phänotypen der Nebenniereninsuffizienz assoziiert, was seine Relevanz für die endokrinologische Forschung und die GPCR-Signaltransduktionsforschung unterstreicht.

MC2-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MC2R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MC2-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MC2R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MC2R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MC2-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MC2R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MC2-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MC2-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MC2R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.