Matrilin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404852-ACT

MATN2 kodiert Matrilin-2, ein modulares Adapterprotein der extrazellulären Matrix (ECM), das zur Organisation von Matrixnetzwerken beiträgt, indem es Kollagene, Proteoglykane und andere Glykoproteine in Bindegeweben miteinander verknüpft. Matrilin-2 unterstützt die Zell‑Matrix‑Adhäsion, die Gewebearchitektur sowie ECM‑Remodelling‑Prozesse, die Zellmigration, Mechanotransduktion und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte MATN2-Expression wurde in Zusammenhängen mit aberranter Matrixablagerung und chronischem Remodelling berichtet, darunter fibrotische und inflammatorische Mikroumgebungen, und kann die Stroma‑Epithel‑Signalgebung beeinflussen. Als matrixassoziierter Faktor ist Matrilin-2 relevant für die Untersuchung der ECM‑Assemblierung, wundheilungsähnlicher Programme und der Regulation des Zellphänotyps durch die Mikroumgebung.

Matrilin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MATN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Matrilin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MATN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MATN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Matrilin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MATN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Matrilin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Matrilin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MATN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.