MATH-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404171-LAC

ATOH1 (MATH-1) kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der während der menschlichen Entwicklung die Festlegung von Zelllinien sowie Differenzierungsprogramme orchestriert. MATH-1 reguliert Gennetzwerke, die die Neurogenese und Entscheidungen über das Schicksal epithelialer Zellen steuern, und integriert dabei Notch-abhängige laterale Inhibition, Wnt/β‑Catenin-Signalgebung und Chromatin-Remodeling, um das Schicksal von Vorläuferzellen festzulegen. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivität von ATOH1 wurde in mehreren Gewebekontexten mit veränderten Differenzierungszuständen und aberranter Proliferation in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als molekularen Einstiegspunkt für die Untersuchung entwicklungsbiologisch verankerter transkriptioneller Schaltkreise unterstützt. Als Knotenpunkt in schicksalsbestimmenden Signalwegen wird ATOH1 häufig in Modellen der neuralen und sensorischen Linienfestlegung, der epithelialen Homöostase sowie der durch Transkriptionsfaktoren getriebenen Umprogrammierung der Zellidentität untersucht.

MATH-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ATOH1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MATH-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ATOH1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MATH-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ATOH1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.