Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MAT Iα Double Nickase Plasmid (h): sc-405476-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MAT Iα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MAT Iα Double-Nickase-Plasmid (h) und MAT Iα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAT1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MAT Iα Double Nickase Plasmid (h) | sc-405476-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAT Iα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405476-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAT1A kodiert die Methionin-Adenosyltransferase I alpha (MAT Iα), ein leberreich exprimiertes Enzym, das die Umwandlung von Methionin und ATP zu S‑Adenosylmethionin (SAM) katalysiert, dem wichtigsten Methylgruppendonor für Methylierungsreaktionen an DNA, RNA, Proteinen und Lipiden. Indem MAT Iα die intrazelluläre Verfügbarkeit von SAM steuert, verknüpft es den Methionin- und Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel mit epigenetischer Regulation, Redox-Homöostase und der Polyamin-Biosynthese. Eine veränderte MAT1A-Expression oder -Aktivität kann das Methylierungspotenzial und metabolische Flussraten stören – Prozesse, die häufig in Studien zu Leberfunktionsstörungen, metabolischer Umprogrammierung und methylierungsassoziierten Phänotypen untersucht werden. Daher wird MAT1A breit eingesetzt, um Zusammenhänge zwischen Nährstoffsensorik, Chromatinzustand und nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen in menschlichen Zellen zu untersuchen.
MAT Iα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAT1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAT1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAT1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAT1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.