Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400887

Übersicht

TPSAB1 kodiert die Mastzelltryptase, eine sekretierte Serinprotease, die in zytoplasmatischen Granula gespeichert und bei der Degranulation von Mastzellen freigesetzt wird. Mastzelltryptase trägt zum proteolytischen Umbau der extrazellulären Matrix, zur Modulation der Zytokin- und Chemokin-Signalübertragung sowie zur Aktivierung proteaseaktivierter Rezeptoren bei und prägt damit Entzündungs- und Gewebereparaturprogramme. Ihre Aktivität ist mit mastzellgetriebenen Prozessen wie erhöhter Gefäßpermeabilität, Rekrutierung von Leukozyten und bronchialer Reaktivität verknüpft, was für allergische Entzündungen und andere immunvermittelte Erkrankungen relevant ist. Als granulaassoziierte Protease wird Mastzelltryptase zudem als molekularer Marker genutzt, um Häufigkeit, Aktivierungszustand und Effektorfunktionsprofile von Mastzellen in menschlichen Geweben zu untersuchen.

Das Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TPSAB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TPSAB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TPSAB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mast Cell Tryptase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TPSAB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mast Cell Tryptase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TPSAB1-Exone abzielen, die für die Mast Cell Tryptase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TPSAB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TPSAB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mast Cell Tryptase HDR-Plasmid (h) und Mast Cell Tryptase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TPSAB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TPSAB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.