Plasmide CRISPR d'Activation (m) MAS1: sc-421561-ACT

Mas1 chez la souris code MAS1, un récepteur couplé aux protéines G de classe A surtout connu comme récepteur de l’angiotensine-(1–7) au sein du système rénine–angiotensine. La signalisation via MAS1 influence le tonus vasculaire et la fonction endothéliale, et module la production d’oxyde nitrique, l’activité MAPK/ERK ainsi que les programmes inflammatoires et fibrotiques en aval. Dans le système nerveux central, MAS1 a été associé à l’excitabilité neuronale et à la plasticité synaptique, reliant ce récepteur à la régulation neurovasculaire et aux circuits sensibles au stress. Une altération de l’activité de l’axe MAS1 est impliquée dans la physiopathologie cardiométabolique et rénale, ce qui fait de Mas1 un nœud utile pour des études mécanistiques de l’inflammation, de la fibrose et du remodelage tissulaire dans des modèles murins.

MAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mas1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mas1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mas1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mas1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mas1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.