MARCKS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400837

Descripción general

MARCKS (sustrato de la C-quinasa rico en alanina y miristoilado) es una proteína asociada a la membrana que regula la actina y actúa como un sustrato destacado de la proteína quinasa C, además de modular la disponibilidad de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2) en la membrana plasmática. Mediante un ciclo dependiente de la fosforilación entre compartimentos de membrana y del citoesqueleto, MARCKS influye en la organización de los filamentos de actina, la forma celular, la adhesión, la motilidad, el tráfico vesicular y el crecimiento de neuritas. MARCKS participa en redes de señalización vinculadas a PKC, a la regulación por calcio/calmodulina y a la dinámica de fosfoinosítidos, que coordinan la remodelación del citoesqueleto y la señalización de membrana. La expresión o fosforilación desregulada de MARCKS se ha asociado con fenotipos de migración e invasión alterados y se ha estudiado en contextos como la biología del cáncer, los procesos de neurodesarrollo y la señalización inflamatoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MARCKS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MARCKS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MARCKS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MARCKS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MARCKS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MARCKS para la investigación de la señalización de MARCKS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MARCKS críticos para la función de MARCKS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MARCKS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MARCKS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MARCKS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MARCKS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MARCKS (h) y el plásmido HDR MARCKS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MARCKS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MARCKS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.