MAPKAPK-2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421557-ACT

Das Mausgen **Mapkapk2** kodiert **MAPKAPK-2 (MK2)**, eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Effektor des **p38-MAPK-Stressantwortwegs** fungiert. Nach Aktivierung phosphoryliert MK2 Substrate wie **HSPB1** und **Tristetraprolin (ZFP36)**, wodurch Programme zur **mRNA-Stabilität und -Translation** neu ausgerichtet und die Produktion entzündlicher Zytokine, die Dynamik von Stressgranula sowie das Remodeling des Zytoskeletts koordiniert werden. Durch die Kontrolle der angeborenen Immun-Signalgebung, von Zellzyklus-Checkpoints und von Apoptose unter Stress trägt MAPKAPK-2 zu experimentell modellierten Prozessen bei, darunter Mechanismen entzündlicher Erkrankungen, Reaktionen auf Gewebeschädigung und Signalgebung im tumorassoziierten Mikromilieu. Aufgrund seiner Position im Signalweg ist es ein nützlicher Knotenpunkt zur Analyse p38-abhängiger transkriptioneller und posttranskriptioneller Regulation in primären und transformierten Mauszellen.

MAPKAPK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mapkapk2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAPKAPK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mapkapk2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mapkapk2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAPKAPK-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mapkapk2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAPKAPK-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAPKAPK-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mapkapk2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.