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MAPKAP-1双切口酶质粒(m) | sc-432741-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Mapkap1 编码 MAPKAP-1(又称 mSIN1),它是 mTOR 复合体 2(mTORC2)必不可少的支架亚基,负责协调激酶信号传导以及该复合体的亚细胞定位。通过 mTORC2,MAPKAP-1 促进并支持 AGC 家族激酶(包括 AKT、SGK 和 PKC)的磷酸化与激活,从而影响细胞存活、细胞骨架动态、离子转运以及代谢适应。MAPKAP-1 依赖的信号与 PI3K/AKT 通路及应激响应网络发生交叉,共同塑造细胞增殖与迁移。mTORC2–AKT 轴活性失调被广泛认为与致癌信号及代谢表型相关,因此 Mapkap1 是研究通路重塑机制的重要关键节点。
MAPKAP-1 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Mapkap1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Mapkap1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Mapkap1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Mapkap1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。