MAP-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400282-NIC

MAP2 kodiert das mikrotubuli-assoziierte Protein 2 (MAP-2), einen in Neuronen stark angereicherten Regulator des Zytoskeletts, der Mikrotubuli in Dendriten stabilisiert und bündelt und damit Neuritenauswuchs, dendritische Verzweigung (Arborisierung) und synaptische Struktur unterstützt. MAP-2 verknüpft die Dynamik der Mikrotubuli mit intrazellulärem Transport und aktivitätsabhängigem Remodeling und integriert Signalwege, die neuronale Polarisierung und Plastizität koordinieren. Eine veränderte Organisation oder Expression von MAP-2 wird häufig als Marker für neuronale Differenzierung und dendritische Integrität verwendet, und eine Dysregulation von MAP2 wurde in experimentellen Modellen mit für neuroentwicklungsbezogene und neuropsychiatrische Erkrankungen relevanten Phänotypen in Verbindung gebracht. Als kanonischer dendritischer Marker wird MAP-2 oft eingesetzt, um Veränderungen der zytoskelettalen Architektur bei Stress, Entzündung und Störungen der Proteostase zu untersuchen, die die neuronale Konnektivität beeinträchtigen.

MAP-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAP2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.