Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAO-B: sc-401732-ACT

MAOB code la monoamine oxydase B (MAO‑B), une enzyme flavino‑dépendante localisée sur la membrane externe des mitochondries, qui catalyse la désamination oxydative des amines biogènes et alimentaires. En régulant le catabolisme de la dopamine, de la phénéthylamine et d’autres monoamines apparentées, la MAO‑B influence l’homéostasie des neurotransmetteurs et génère du peroxyde d’hydrogène comme sous-produit, reliant ainsi son activité à l’équilibre rédox mitochondrial et aux voies du stress oxydant. La fonction de la MAO‑B se situe au carrefour de la signalisation monoaminergique, du métabolisme mitochondrial et des réponses cellulaires au stress dans les tissus neuronaux et périphériques. Une expression altérée de MAOB ou une activité modifiée de la MAO‑B ont été associées à la biologie des maladies neurodégénératives et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des phénotypes moléculaires liés à l’inflammation et au vieillissement, ce qui étaye des études mécanistiques du renouvellement des monoamines et des processus dépendants des ERO (espèces réactives de l’oxygène).

MAO-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAOB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAO-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAOB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAOB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAO-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAOB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAO-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAO-B dans les cellules tumorales présentant une expression de MAOB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.