Plásmido CRISPR de Activación (m) MAK: sc-421549-ACT

El gen Mak de ratón codifica la quinasa asociada a células germinales masculinas (MAK), una quinasa de serina/treonina que contribuye al control del ciclo celular y a programas de diferenciación, con funciones destacadas en la biología relacionada con los cilios. La actividad de MAK se ha vinculado con la regulación de la progresión mitótica y con redes de señalización dependientes de la fosforilación que influyen en la organización de los microtúbulos y la función del centrosoma. En células diferenciadas, MAK participa en la regulación de la longitud del cilio primario y en el tráfico ciliar, procesos que modulan vías de transducción de señales como Hedgehog. La desregulación de las vías asociadas a MAK se ha estudiado en el contexto de fenotipos proliferativos y de defectos del desarrollo y de la homeostasis tisular dependientes de los cilios, lo que respalda su relevancia para el modelado mecanístico de enfermedades.

MAK El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mak sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAK El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mak en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mak, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mak y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAK en células tumorales con expresión de Mak silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.