Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
MAF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427213
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MAF1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MAF1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MAF1 Anticuerpo (H-2): sc-515614
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MAF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427213 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Maf1 codifica MAF1, un represor transcripcional conservado que modula la actividad de la ARN polimerasa III y coordina la biosíntesis con las señales de nutrientes y de estrés. En células de ratón, la actividad de MAF1 integra TORC1/mTOR y otras vías de quinasas para controlar la transcripción de tRNA y del rRNA 5S, conectando el estado metabólico con la proteostasis y el crecimiento celular. Mediante la regulación de la transcripción dependiente de la Pol III, MAF1 influye en la proliferación, las respuestas al estrés celular y los programas de homeostasis energética. La desregulación del control de la Pol III y de las vías de señalización metabólica se ha asociado con fenotipos de crecimiento alterados y procesos relevantes para enfermedades, lo que convierte a Maf1 en un nodo útil para estudios mecanísticos en metabolismo, adaptación al estrés y control del crecimiento.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MAF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Maf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Maf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Maf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MAF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Maf1 para la investigación de la señalización de MAF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Maf1 críticos para la función de MAF1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Maf1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MAF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MAF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Maf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MAF1 (m) y el plásmido HDR MAF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Maf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Maf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.