Plásmido CRISPR de Activación (h) mAChR M1: sc-401453-ACT

CHRM1 codifica el receptor muscarínico humano de acetilcolina M1 (mAChR M1), un receptor acoplado a proteína G que señaliza principalmente a través de Gq/11 para activar la fosfolipasa C, aumentar el Ca2+ intracelular y estimular cascadas dependientes de PKC. Entre los efectos posteriores se incluyen la modulación de la señalización MAPK/ERK, el recambio de fosfoinosítidos y programas de transcripción dependientes de la actividad que determinan la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica. mAChR M1 también influye en la regulación colinérgica de circuitos corticales e hipocampales, así como en respuestas secretoras y del músculo liso en tejidos periféricos. La expresión o señalización alteradas de CHRM1 se han implicado en contextos de investigación neuropsiquiátrica y neurodegenerativa, incluidos estudios sobre cognición, atención y disfunción colinérgica.

mAChR M1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mAChR M1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mAChR M1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mAChR M1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mAChR M1 en células tumorales con expresión de CHRM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.