MACF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418945
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- MACF1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im MACF1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MACF1: sc-377532
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MACF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-418945 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Macf1 kodiert den Microtubule Actin Crosslinking Factor 1 (MACF1), ein großes Spektraplakine-Protein, das Mikrotubuli mechanisch und funktionell mit dem Aktin-Zytoskelett verbindet, um Zellpolarität, Migration und den intrazellulären Transport zu koordinieren. In Mauszellen unterstützt MACF1 den Turnover fokaler Adhäsionen und den Umbau des Zytoskeletts und wurde über die Regulation der Dynamik des Axin-Komplexes mit der Wnt/β-Catenin-Signalübertragung in Verbindung gebracht, wodurch zytoskelettabhängige Signaloutputs beeinflusst werden. Durch die Integration von Aktin- und Mikrotubuli-Netzwerken trägt MACF1 zur neuronalen Entwicklung, zur Organisation von Epidermis- und Darmgewebe sowie zu Reaktionen auf mechanische Reize bei. Eine Fehlregulation MACF1-assoziierter Zytoskelettprogramme wurde in Kontexten wie neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, Barriereintegrität und metastasenähnlichen Migrationsverhalten untersucht, die für Modelle der Krebsbiologie relevant sind.
Das MACF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Macf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Macf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Macf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MACF1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Macf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MACF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Macf1-Exone abzielen, die für die MACF1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Macf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom MACF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MACF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Macf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MACF1 HDR-Plasmid (m) und MACF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Macf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Macf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.