MACC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404253-ACT

Humanes MACC1 (metastasis associated in colon cancer 1) kodiert einen transkriptionellen Regulator, der an der Kontrolle von Zellmotilität, invasivem Wachstum und Überlebensprogrammen beteiligt ist. MACC1 ist eng mit der HGF/MET-Signalgebung sowie der nachgeschalteten Aktivität der PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege verknüpft und koordiniert Genexpressionsänderungen, die epithelial-mesenchymalen-Transitions(EMT)-ähnliche Phänotypen sowie den Umbau der Zytoskelett- und Adhäsionsdynamik unterstützen. Eine veränderte MACC1-Expression wurde bei mehreren soliden Malignomen mit Tumorprogression und metastatischem Verhalten in Verbindung gebracht, was MACC1 zu einem nützlichen molekularen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Netzwerke macht, die Wachstumsfaktorsignale mit Migration koppeln. Seine Regulation und nachgeschalteten Zielgene werden daher in Modellen der Krebsbiologie häufig untersucht, unter anderem in Studien zu Invasion, metastaseassoziierten Transkriptionssignaturen und Signalweg-Crosstalk.

MACC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MACC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MACC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MACC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MACC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MACC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MACC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MACC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MACC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MACC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.