M-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401232

Panoramica

CDH15 codifica la M-caderina, un recettore di adesione cellula–cellula calcio-dipendente, arricchito nel muscolo scheletrico, che supporta il riconoscimento, l’allineamento e la fusione dei mioblasti durante la miogenesi e la rigenerazione muscolare. Attraverso giunzioni mediate da caderine e il collegamento a β-catenina/p120-catenina e al citoscheletro di actina, la M-caderina contribuisce a una segnalazione dipendente dal contatto che influenza il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e i programmi di differenziamento. L’attività di CDH15 interseca vie che regolano la dinamica delle giunzioni aderenti e può modulare risposte cellulari rilevanti per la riparazione e il rimodellamento dei tessuti. Un’espressione alterata delle caderine, inclusa CDH15, è stata associata a cambiamenti nell’adesione cellulare e nel comportamento invasivo in contesti patologici, rendendola rilevante per studi sulle interazioni cellula–cellula nei tumori e sulla fisiopatologia associata al muscolo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO M-cadherin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDH15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDH15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDH15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina M-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDH15 per lo studio della segnalazione di M-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDH15 critici per la funzione di M-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDH15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal M-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal M-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDH15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal M-cadherin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR M-cadherin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDH15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDH15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.