Plasmide CRISPR d'Activation (h) LZTR1: sc-404531-ACT

LZTR1 (leucine zipper-like transcription regulator 1) code une protéine adaptatrice de la famille BTB-Kelch, localisée à l’appareil de Golgi et agissant au sein de complexes d’E3 ubiquitine-ligase dépendants de CUL3 pour réguler l’ubiquitination des protéines et leur renouvellement. Elle a été impliquée dans le contrôle de l’activité de la voie RAS/MAPK via la modulation des protéines de la famille RAS et de nœuds de signalisation associés, qui influencent la prolifération, la différenciation et l’homéostasie cellulaire. Une activité altérée de LZTR1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une prédisposition tumorale, notamment le syndrome de Noonan et la schwannomatose, ce qui en fait une cible utile pour étudier, dans les cellules humaines, le contrôle de la signalisation médié par l’ubiquitine. En tant que régulateur lié à une voie de signalisation, LZTR1 soutient des investigations mécanistiques sur la protéostasie, les plateformes de signalisation associées aux membranes et les relations génotype–phénotype.

LZTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LZTR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LZTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LZTR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LZTR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LZTR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LZTR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LZTR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LZTR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LZTR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.