LYPLA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409535

Übersicht

PLA2G15 kodiert LYPLA3, eine lysosomale Phospholipase/Deacylase, die am Phospholipidumsatz und am Remodeling von Membranlipiden durch Hydrolyse von Fettsäure-Acylketten beteiligt ist. Durch seinen Beitrag zum lysosomalen Lipidkatabolismus ist LYPLA3 in Signal- und Prozesswege eingebunden, die den endolysosomalen Transport, die autophagiegekoppelte Degradation und die zelluläre Lipidhomöostase steuern. Eine fehlregulierte lysosomale Lipidverarbeitung ist allgemein relevant für metabolische Stressantworten und kann inflammatorische Signalwege sowie die Funktion von Organellen beeinflussen, was LYPLA3 zu einem geeigneten Ansatzpunkt macht, um lipidgetriebene Störungen in menschlichen Zellen zu untersuchen. Die funktionelle Analyse von LYPLA3 unterstützt mechanistische Studien zum Lipidstoffwechsel und zu lysosomenzentrierten Prozessen, die in krankheitsassoziierten zellulären Zuständen häufig verändert sind.

Das LYPLA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLA2G15-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLA2G15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLA2G15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LYPLA3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLA2G15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LYPLA3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PLA2G15-Exone abzielen, die für die LYPLA3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLA2G15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LYPLA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LYPLA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLA2G15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LYPLA3 HDR-Plasmid (h) und LYPLA3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLA2G15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLA2G15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.