LYPLA2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405133-ACT

Humanes **LYPLA2** kodiert die **Acyl-Protein-Thioesterase 2 (APT2)**, eine Serin-Hydrolase, die thioestergebundene Fettsäurereste von **S-palmitoylierten Proteinen** entfernt und dadurch die Membranassoziation, den Transport (Trafficking) und die Signaldynamik von Proteinen moduliert. Durch die Regulation von Depalmitoylierungszyklen trägt LYPLA2 zur lipidvermittelten Kontrolle der subzellulären Lokalisation und des Umsatzes von Signalproteinen bei und kann die Organisation des Endomembransystems sowie den vesikulären Transport beeinflussen. Diese Aktivität verbindet LYPLA2 mit umfassenderen Netzwerken der Lipidhomöostase und posttranslationalen Modifikationen, die in unterschiedlichen Zelltypen Stärke und Dauer von Signalwegen prägen. Eine Fehlregulation der Protein‑Palmitoylierung/Depalmitoylierung wurde mit veränderter onkogener Signalübertragung, Neurobiologie und Immunregulation in Verbindung gebracht, wodurch LYPLA2 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien lipidgesteuerter Signalphänotypen ist.

LYPLA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LYPLA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LYPLA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LYPLA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LYPLA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LYPLA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LYPLA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LYPLA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LYPLA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LYPLA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.