Plásmido Doble Nickase (h) Ly-6K: sc-404264-NIC

LY6K codifica la proteína humana de superficie Ly-6K anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI), miembro de la superfamilia Ly6/uPAR, implicada en la comunicación célula–célula y en la modulación de la señalización proximal a la membrana. La expresión de Ly-6K se ha asociado con cambios en el comportamiento de las células epiteliales, incluyendo proliferación, migración e invasión, en consonancia con funciones en vías que integran la dinámica de adhesión y la señalización de factores de crecimiento en la membrana plasmática. Se ha descrito expresión desregulada de LY6K en múltiples tipos de tumores y con frecuencia se explora como marcador de programas oncogénicos y fenotipos celulares agresivos. Estas propiedades hacen de LY6K una diana relevante para estudios mecanísticos de la biología tumoral, la regulación de la señalización de membrana y los estados transcripcionales asociados al cáncer.

Ly-6K El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LY6K en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LY6K. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LY6K. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LY6K alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.