LXR alpha/NR1H3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423616-ACT

Nr1h3 kodiert den Liver-X-Rezeptor Alpha (LXRα/NR1H3), einen ligand-aktivierten nukleären Rezeptor, der mit RXR Heterodimere bildet und so Transkriptionsprogramme reguliert, die den Cholesterin-Export, den Gallensäurestoffwechsel und die Fettsäuresynthese steuern. In Makrophagen und Hepatozyten koordiniert LXRα die Lipidverarbeitung über Zielgene wie ABCA1/ABCG1 und ist mit der angeborenen Immun-Signalgebung verknüpft, um die Expression entzündungsassoziierter Gene zu modulieren. Diese Signalwege verbinden die NR1H3-Aktivität mit der Biologie von Schaumzellen, atherogener Lipidakkumulation und metabolischer Entzündung und machen NR1H3 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die Untersuchung der Lipidhomöostase in kardiovaskulären und metabolischen Krankheitsmodellen. In Mausmodellen wird eine Veränderung von Nr1h3 zudem eingesetzt, um das Zusammenspiel zwischen Sterol-Sensing, hepatischer Lipogenese und der Polarisierung von Immunzellen zu analysieren.

LXR alpha/NR1H3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nr1h3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LXR alpha/NR1H3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nr1h3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nr1h3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LXR alpha/NR1H3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nr1h3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LXR alpha/NR1H3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LXR alpha/NR1H3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nr1h3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.