Lumican CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402001

Übersicht

LUM kodiert für Lumican, ein kleines leucinreiches Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das an Kollagenfibrillen bindet und deren Zusammenbau, Abstand und biomechanische Eigenschaften reguliert. Durch die Modulation der Matrixorganisation und der Zell‑Matrix‑Adhäsion beeinflusst Lumican Prozesse wie Gewebeumbau, Wundheilung und stromale Signalgebung, die mit Signalwegen verknüpft sind, welche Migration, Proliferation und Entzündungsreaktionen steuern. Eine veränderte LUM-Expression oder extrazelluläre Verteilung wurde mit Fibrose, Hornhaut‑ und Bindegewebsphänotypen sowie dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht und ist daher für Studien zu matrixgetriebenen Krankheitsmechanismen relevant. Lumican wird außerdem als Marker und funktioneller Knotenpunkt in der Forschung zu stromalen Zellzuständen und zur Homöostase der extrazellulären Matrix verwendet.

Das Lumican CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LUM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LUM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LUM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Lumican-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LUM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Lumican-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LUM-Exone abzielen, die für die Lumican-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LUM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Lumican CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Lumican CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LUM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Lumican HDR-Plasmid (h) und Lumican HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LUM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LUM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.