Plasmide CRISPR/Cas9 KO LTBP-4 (h): sc-405419

Présentation

LTBP4 code la latent transforming growth factor beta binding protein 4 (LTBP-4), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui s’associe aux microfibrilles de fibrilline et régule la séquestration, le stockage et la biodisponibilité des complexes latents de TGF-β. Par ces interactions, LTBP-4 influence la dynamique de signalisation de la voie TGF-β et contribue aux programmes d’assemblage et de remodelage de la matrice qui façonnent l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et l’élasticité des tissus. La fonction de LTBP4 est étroitement liée à l’homéostasie des fibres élastiques via une coordination avec l’élastine et les composants microfibrillaires, ce qui affecte l’intégrité structurelle des tissus conjonctifs. Des altérations génétiques ou des modifications d’expression de LTBP4 ont été impliquées dans des phénotypes du tissu conjonctif et cardiopulmonaires, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude de la biologie de la matrice extracellulaire et des mécanismes de maladies dépendants du TGF-β.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LTBP-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LTBP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LTBP4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LTBP4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LTBP-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LTBP4 pour l'étude de la signalisation de LTBP-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LTBP4 essentiels à la fonction de LTBP-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LTBP4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LTBP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LTBP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LTBP4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LTBP-4 plasmide HDR (h) et le LTBP-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LTBP4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LTBP4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.