LTBP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405419

Übersicht

LTBP4 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor-β-Bindungsprotein 4 (LTBP-4), ein extrazelluläres Matrixglykoprotein, das mit Fibrillin-Mikrofibrillen assoziiert und die Sequestrierung, Speicherung und Bioverfügbarkeit latenter TGF-β‑Komplexe reguliert. Über diese Interaktionen beeinflusst LTBP-4 die Signaldynamik des TGF-β‑Signalwegs und trägt zu Programmen des Matrixaufbaus und -umbaus bei, die Zelladhäsion, Mechanotransduktion und Gewebeelastizität prägen. Die Funktion von LTBP4 ist eng mit der Homöostase elastischer Fasern verknüpft, indem es die Koordination mit Elastin und mikrofibrillären Komponenten unterstützt und so die strukturelle Integrität von Bindegeweben beeinflusst. Eine genetische Störung oder veränderte Expression von LTBP4 wurde mit Bindegewebs- sowie kardiopulmonalen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, was seine Relevanz für Studien zur Biologie der extrazellulären Matrix und zu TGF-β‑abhängigen Krankheitsmechanismen unterstreicht.

Das LTBP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LTBP4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LTBP4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LTBP4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LTBP-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LTBP4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LTBP-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LTBP4-Exone abzielen, die für die LTBP-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LTBP4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LTBP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LTBP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LTBP4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LTBP-4 HDR-Plasmid (h) und LTBP-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LTBP4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LTBP4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.