Plasmide CRISPR d'Activation (h) LTBP-4: sc-405419-ACT

LTBP4 code la latent transforming growth factor beta binding protein 4 (LTBP-4), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui se lie aux complexes latents de TGF-β et coordonne leur séquestration, leur stabilisation et leur activation régulée dans l’espace péricellulaire. Grâce à ses interactions avec les microfibrilles de fibrilline et les assemblages associés à l’élastine, LTBP-4 favorise la formation des fibres élastiques et l’organisation de la matrice, modulant la mécanotransduction et le remodelage tissulaire. Le contrôle, dépendant de LTBP-4, de la biodisponibilité du TGF-β relie ce gène à la dynamique de la signalisation SMAD, qui influence le comportement des fibroblastes, le dialogue épithélio-mésenchymateux et les programmes de réparation des plaies. Des altérations de l’expression ou de la fonction de LTBP4 sont associées à des phénotypes du tissu conjonctif et pulmonaires, ce qui souligne sa pertinence dans l’étude de l’homéostasie de la matrice extracellulaire et des pathologies pilotées par le TGF-β.

LTBP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LTBP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LTBP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LTBP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LTBP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LTBP-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LTBP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LTBP-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LTBP-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de LTBP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.