Plasmide CRISPR d'Activation (m) LTBP-3: sc-421482-ACT

Ltbp3 code pour la latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui se lie aux complexes latents de TGF-β et régule leur séquestration, leur activation et leur présentation spatiale dans le microenvironnement tissulaire. En contrôlant la biodisponibilité du TGF-β, LTBP-3 influence la signalisation dépendante des SMAD, le remodelage de la matrice et les décisions de destinée cellulaire au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Des études chez la souris associent LTBP-3 à la morphogenèse squelettique, à l’intégrité des tissus conjonctifs et à la biologie vasculaire, ce qui reflète son rôle dans la coordination de la signalisation des facteurs de croissance avec l’organisation de la matrice extracellulaire. Une activité dérégulée de l’axe LTBP-3–TGF-β est pertinente, dans des contextes de recherche mécanistique, pour le remodelage de type fibrotique, l’ostéogenèse aberrante et la signalisation stromale associée aux tumeurs.

LTBP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ltbp3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LTBP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ltbp3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ltbp3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LTBP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ltbp3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LTBP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LTBP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ltbp3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.