Plasmide CRISPR d'Activation (h) LTBP-3: sc-404036-ACT

LTBP3 code la latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui se lie au complexe latent du TGF-β et contribue à contrôler sa séquestration, son stockage et son activation spatiale dans les tissus. En régulant la biodisponibilité du TGF-β, LTBP-3 participe à la signalisation dépendante de SMAD et aux processus de remodelage de la matrice extracellulaire qui influencent l’adhésion, la migration et la différenciation cellulaires, ainsi que l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une fonction altérée de LTBP3 a été associée à une dérégulation de la signalisation du TGF-β dans des contextes tels que la fibrose, le remodelage des tissus conjonctifs et la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation dépendante de la matrice. Les chercheurs étudient couramment LTBP-3 dans les voies reliant l’organisation de la MEC à l’activation des facteurs de croissance et aux programmes transcriptionnels en aval.

LTBP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LTBP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LTBP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LTBP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LTBP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LTBP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LTBP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LTBP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LTBP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de LTBP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.