LTBP-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402289-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LTBP-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LTBP-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und LTBP-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LTBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LTBP-1: sc-271140
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LTBP-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402289-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LTBP-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402289-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LTBP1 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor-β-Bindungsprotein 1 (LTBP-1), ein Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das latente TGF-β-Komplexe bindet, sequestriert und reguliert und so deren Ablagerung, Speicherung und Aktivierung in Bindegeweben koordiniert. Durch die Kontrolle der räumlichen und zeitlichen Bioverfügbarkeit von TGF-β beeinflusst LTBP-1 die SMAD-abhängige Signalübertragung, den Umbau der Matrix, Zelladhäsion und Mechanotransduktion während der Entwicklung und der Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte LTBP1-Expression oder eine veränderte, mikrofilamentassoziierte Lokalisation kann den Grundtonus des TGF-β-Signalwegs und die Organisation der extrazellulären Matrix stören und verknüpft diese Achse mit fibrotischem Remodeling, strukturellen Gefäß- und Herzphänotypen sowie der Biologie des Tumormikromilieus. LTBP-1 wird daher breit in Signalwegen untersucht, die die epithelial–mesenchymale Plastizität, entzündungsassoziiertes Remodeling und das Signalkreuzgespräch zwischen Stroma und Parenchym steuern.
LTBP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LTBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LTBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LTBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LTBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.