LT-β Double Nickase Plasmid (h): sc-404663-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LT-β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LT-β Double-Nickase-Plasmid (h) und LT-β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LTB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LT-β: sc-517341
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LT-β Double Nickase Plasmid (h) | sc-404663-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LT-β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404663-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lymphotoxin-β (LT-β), kodiert durch das menschliche LTB-Gen, ist ein Typ-II-Membranprotein der TNF-Superfamilie, das sich mit Lymphotoxin-α zum LTα1β2-Heterotrimer zusammensetzt und seine Signale überwiegend über den Lymphotoxin-β-Rezeptor (LTβR) vermittelt. Diese Achse aktiviert kanonische und nichtkanonische NF-κB-Signalwege, um die Organogenese lymphoider Gewebe, den Austausch zwischen Stroma und Immunsystem, Chemokin-Netzwerke sowie die Aufrechterhaltung von Gewebemikroumgebungen zu regulieren, die die adaptive Immunität unterstützen. LTB trägt zur Organisation sekundärer lymphoider Strukturen und zu mukosalen Immunantworten bei und beeinflusst dabei Nischen der Antigenpräsentation sowie Programme der Leukozytenmigration. Eine fehlregulierte LTβR-Signalübertragung wird mit chronischer Entzündung, autoimmunen Phänotypen und einer tumorassoziierten Umgestaltung der Immunumgebung in Verbindung gebracht, was LTB zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien in der Immunologie und Krebsbiologie macht.
LT-β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LTB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LTB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LTB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LTB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.