Plasmide CRISPR d'Activation (h) LSR: sc-401518-ACT

Le LSR humain (lipolysis stimulated lipoprotein receptor), également appelé angulin-1, est une protéine associée à la membrane qui participe à la prise en charge des lipides et des lipoprotéines et contribue à l’organisation de la barrière épithéliale au niveau des jonctions serrées tricellulaires. En coordonnant l’architecture des jonctions et le trafic membranaire, le LSR influence la polarité cellulaire, la perméabilité paracellulaire et l’homéostasie tissulaire dans les épithéliums formant une barrière. Une expression altérée du LSR a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique et à un dysfonctionnement de la barrière, des processus pertinents pour l’inflammation, les troubles métaboliques et les modifications de l’intégrité épithéliale associées aux tumeurs. Ces fonctions font du LSR un nœud d’intérêt pour étudier le dialogue entre les voies lipidiques et les réseaux de signalisation des jonctions.

LSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LSR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LSR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LSR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LSR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LSR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LSR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LSR dans les cellules tumorales présentant une expression de LSR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.