LSM8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404816-ACT

Das humane Gen **LSM8** kodiert ein Sm-ähnliches RNA-bindendes Protein, das ein Kernbestandteil des U6-kleinen nukleären Ribonukleoproteins sowie des LSm2–8-Rings ist und zur Stabilität der U6-snRNA, zur snRNP-Biogenese und zum Aufbau des Spleißosoms während des Prä-mRNA-Spleißens beiträgt. Über diese Funktionen unterstützt LSM8 die präzise Entfernung von Introns und die Integrität des Transkriptoms und ist damit mit RNA-Prozessierungsnetzwerken verknüpft, die den Zellzyklusverlauf und stressresponsive Genexpressionsprogramme mitgestalten. Störungen der Homöostase von Spleißosomen und snRNPs sind in vielen Krankheitskontexten breit mit aberranten mRNA-Isoformen und fehlregulierter Genexpression assoziiert, wodurch LSM8 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu spleißabhängigen Phänotypen darstellt. Seine essenzielle Rolle im RNA-Stoffwechsel bietet zudem einen klar definierten Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie zentrale Spleißfaktoren den zellulären Zustand und die Proteomvielfalt beeinflussen.

LSM8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LSM8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LSM8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LSM8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LSM8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LSM8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LSM8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LSM8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LSM8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LSM8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.