Lsh Lentiviral Activation Particles (h): sc-402466-LAC

Das humane HELLS-Gen kodiert die lymphoidspezifische Helikase (Lsh), einen ATP-abhängigen Chromatin-Remodeler der SNF2-Familie, der mit DNA-Methyltransferasen zusammenwirkt, um DNA-Methylierungsmuster und repressive Chromatinzustände zu etablieren und aufrechtzuerhalten. Lsh unterstützt die Organisation von Heterochromatin, die Stilllegung von Transposons und die replizierungsgekoppelte Chromatinassemblierung und verknüpft damit ATP-getriebenes Nukleosomen-Remodeling mit Genomstabilität und epigenetischer Vererbung. Über die Regulation der Chromatinzugänglichkeit ist es an Signalwegen beteiligt, die DNA-Reparatur, Zellzyklusprogression und linienspezifische Transkriptionsprogramme steuern. Eine fehlregulierte HELLS-Aktivität und veränderte Lsh-Expression wurden mit epigenomischer Instabilität und aberranten Gen-Silencing-Programmen in mehreren Tumorkontexten sowie Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht und machen HELLS zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur epigenetischen Kontrolle.

Lsh Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HELLS-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Lsh Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HELLS-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Lsh-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HELLS-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.