Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LRRC8D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406426
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LRRC8D CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してLRRC8Dゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: LRRC8D 抗体 (A-12): sc-515070
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LRRC8D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-406426 | 20 µg | $397.00 |
概要
LRRC8Dは、細胞容積調節性アニオンチャネル（VRAC）のロイシンリッチリピート含有サブユニットをコードします。VRACはヘテロ多量体複合体であり、細胞の膨張によって活性化されるアニオンのフラックスを介して、細胞容積の恒常性維持に寄与します。LRRC8Dを含むVRAC複合体は、オスモライトや小分子アニオンの輸送に影響を及ぼし、酸化還元バランスや細胞ストレス応答を調節し得ます。これらは増殖、アポトーシス、炎症性シグナル伝達などのプロセスとも交差します。免疫組織やバリア組織では、LRRC8Dを含むVRACの組成が、活性酸素種（ROS）の制御や刺激依存的なシグナル出力の調節と関連づけられています。VRAC活性の破綻やLRRC8サブユニット発現パターンの変化は、がん生物学、代謝ストレス、免疫介在性の病態生理などの文脈で研究されており、そこではイオン輸送と酸化ストレス経路がしばしば再編成されています。
LRRC8D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLRRC8D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LRRC8D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LRRC8Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRRC8Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、LRRC8Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LRRC8D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- LRRC8Dの機能に不可欠なLRRC8Dエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、LRRC8Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- LRRC8D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLRRC8D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LRRC8D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
LRRC8D HDRプラスミド（h）および LRRC8D HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLRRC8Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLRRC8D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。